硒的作用副作用吗？
硒是机体必需的微量元素之一，通过酶系统作用于细胞，调节代谢过程，具有抗氧化、免疫增强和抗癌变的作用，对维持机体内环境稳定起着重要作用[1-2]。目前对于硒的认识大多数局限于其生物效应上，而对于其在体内的作用机制研究较少。 本实验采用不同浓度的Se（NH4）203溶液喂饲小鼠，利用HPLC-ICPMS技术检测血清及肝组织中活性氧（ROS）水平的变化，并通过荧光显微镜观察肝脏细胞超微结构的变化，从而探讨Se的体内作用机制。
1材料与方法 1.1试剂与仪器
L-半胱氨酸、盐酸环磷腺苷、DNS(二硝基水杨酸)购自Sigma公司；牛血清蛋白、胰蛋白胨、酵母粉为Biological Industries产品；硒粉（99%）购于济南润丰化工有限公司；其余试剂均为进口分装或分析纯，购自中国医药集团上海化学试剂公司。HPR-56型离心机（德国Eppendorf公司）；TGL-16M台式高速冷冻离心机（长沙湘仪离心机仪器有限公司）；F-760原子吸收光谱仪（北京普析通用仪器有限责任公司）；AB265-IRM原子发射光谱仪（日本SHIMADZU公司）；Agilent1260高效液相色谱仪（美国 Agilent公司）；Bruker-D8-Advance粉末X射线衍射仪（德国Bruker公司）。
L.2 动物与养殖条件
清洁级6周龄Sprague-Dawley雌性小鼠50只，体质量（25±2）g，由山东大学医学实验动物中心提供（许可证号SCKX2014-001）。所有动物单笼饲养，温度控制在(20±2)℃，湿度控制在50%~60%，每日光照时长为8：00～19：00，自由进食和水。
1.3动物分组与处理
将50只小鼠随机分为5组，每组10只。分别为模型对照组、低剂量硒组（0.01mmol/L）、中剂量硒组（0.1mmol/L）和高剂量硒组（1.0mmol/L），于给药第1天开始，每天灌胃给予相应浓度硒溶液（用蒸馏水配制成所需浓度）。另设一对照组，不给予任何处理，每天灌胃等体积的蒸留水。各组动物连续灌胃3 d，最后1次给药后1 h，摘眼球取血，离心分离血清置于-20℃冰箱储存备用。同时，取出肝组织，一部分立即置于液氮冷冻待用，另一部分用于RNA的提取。
1.4测定指标及方法
1.4.1生化指标的测定
总胆红素（TBIL）、直接胆红素（DBIL）、尿素氮（BUN）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、肌酐（CREA）含量的测定按相应的试剂盒说明书进行操作。
1.4.2 HPLC-ICPMS 检测 ROS的水平
参照文献[3]并稍作修改。取新鲜小鼠血清5μL加入2 mL含4%戊二醛的磷酸盐缓冲液（0.1mo1/L，pH=7.2）中，混匀后置37℃温孵箱中孵育30min，取出后于冰上冷却5min，12000r/min离心20min，收集上清液即为基础样品。向基础样品中加入10%三氯乙酸溶液2mL，旋涡混合器震荡5min，12000r／min离心20min，吸取上清液于新的塑料离心管中，依次加入2%硼酸溶液、NazCO；溶液和柠檬酸钠溶液（2个加样孔分别添加），定容至500uL，摇匀，待测。
根据已建立的液相色谱-电感耦合等离子体质谱（LC-ICPMS）方法对ROS水平进行检测。 具体方法见参考文献［4］。
1.4.3组织学检查
取部分新鲜小鼠肝脏置入10%甲醛溶液固定，常规石蜡包埋、切片（片厚3~4μm），作HE染色，光学显微镜下观察肝细胞形态并拍照。
1.4.4氧化损伤指标的检测
取另一部分新鲜肝脏组织，应用核苷酸二磷酸激酶（NDPK）法测定还原型谷胱甘肽（GSH）含量；硝酸还原酶法测硝酸盐NO3-）含量，计算亚硝酸盐（NO2-）含量。以上两种物质均为抗氧化剂，其水平的改变能够间接反映机体抗氧化能力的大小。
1.5统计学处理
数据以x±s表示，使用SPSS17.0统计软件进行单因素方差分析和q检验，以P0